电话：400-050-4006
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热烈庆祝西美杰荣获LGC亚太区最佳销售金奖
2024年9月，在泰国普吉岛举办的2024年LGC亚太渠道合作伙伴会议上，北京西美杰科技有限公司因在2023-2024年度连续出色的表现，被LGC D&K K...2024-10-24更多>
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西美杰成功举办生物制品质量控制主题线下研讨会
2024年8月20日-21日，西美杰联合Cygnus、舟帆生物，分别在苏州和上海举办了两场生物制品质量控制主题研讨会，研讨会邀请了Cygnus高级技术经理...2024-08-29更多>
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LIVE WEBINAR | 细胞基因治疗生物工艺中应对大规模样本的下游工...
病毒载体技术的研究不断深入和发展，为遗传物质的递送提供了理想工具，成为目前细胞治疗与基因治疗的主要递送技术。然而，研究人员在细胞基因...2024-08-22更多>
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西美杰邀您参加生物制品质量控制之工艺杂质与纯度检测研讨会
生物制品中HCP残留含量通常被认为是产品的关键质量属性(CQA)，是工艺稳健性监测的重要评价指标，也是产品的重要质控指标。各国法规都有涉及HC...2024-07-26更多>
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喜大普奔！Pfanstiehl 注射级L-精氨酸 (A-170) CDE登记号已激活！
“ 热烈祝贺Pfanstiehl品牌注射级精氨酸A-170 CDE注册登记号F20190000412已激活！”Pfanstiehl新年喜讯频传，注射级精氨酸A-170 CDE登记号F20190000412激活了。Pfanstiehl品牌注射级精氨酸A-170，秉承一贯高品质理念，具有超高纯度，超低内毒素，超低金属残留的特点，单独检测29种金属离子，并且新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶和脂肪酶，亚硝酸盐等多项质量指标的检测，符合多国药典规定（USP, EP, JPE, ChP），可用于生物治疗性药物和疫苗的生产。产品信息： · 产品名称: L-Arginine, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals, USP,EP, JP, ChP (A-170)· 中文名称：L-精氨酸· 分子式：C6H14N4O2· 分子量：174.20 g / mo· CAS号：74-79-3· 产品货号：A-170产品特点：· 超高纯度，超低内毒素，超低微生物含量，超低金属杂质残留· 质量指标新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶，脂肪酶和亚硝酸盐检测· 符合多国药典：USP, EP, JPE, ChP· 符合ICH Q3D标准· 符合GMP标准产品应用：· 缓冲液· 降粘 如果您对Pfanstiehl的注射级L-精氨酸A-170 感兴趣，可联系Pfanstiehl中国区代理北京西美杰科技有限公司获得详细的产品概况说明文件如下。也欢迎联系获取测试样品。Pfanstiehl Inc.产品系列如下，欢迎联系北京西美杰科技有限公司 获取100g装免费样品。 北京西美杰科技有限公司为Pfanstiehl中国代理，为客户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎拨打西美杰客服电话400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>抗体片段捕获的利器---FabsorbentTM F1P HF亲和层析填料
近年来，抗体和抗体片段在生物大分子治疗和诊断领域备受关注，很多抗体类药物已经步入商业化生产阶段。相较于完整的抗体，抗体片段分子量低，组织渗透性好，少有复杂的糖基化结构，可以使用多种原核或真核细胞培养平台进行表达，已成为很多生物技术公司的研究热点。与完整的抗体不同，很多抗体片段分子结构中没有Fc端，无法用传统的Protein A亲和层析填料进行捕获，而Protein L亲和层析填料，由于可以结合抗体轻链的可变区域，为抗体片段的捕获提供了可靠的技术手段。但市面上常见的Protein L亲和层析填料稳定性普遍较低，填料无法耐受高浓度碱液的清洁，配基脱落严重，且价格昂贵，给纯化工艺带来了极大的挑战。 FabsorbentTM F1P HF是Astrea Bioseparations公司近年来推出的亲和层析填料，填料基架是粒径均一的高交联琼脂糖，基架上修饰有化学合成的小分子配基，可以高效捕获各种抗体片段分子。相较于Protein L亲和层析填料，FabsorbentTM F1P HF的结合范围更广泛，填料可以耐受高达1M NaOH的清洁，其主要优势特点归纳如下： 结合范围广，既可以结合kappa型轻链，也可以结合lambda型轻链，对一些非人源性的抗体（如鼠源性、牛源性、羊源性等）也有一定的结合能力，可广泛地用于F(ab’)2, Fab, scFv, VL, IgG的捕获。 小分子化学合成配基，无动物源性，稳定性好，安全性高。 填料可以耐受0.5-1M NaOH的清洁和消毒，清洁效果好，寿命长。 应用案例1：FabsorbentTM F1P HF捕获F(ab’)2抗体片段 在该测试案例中，研究人员使用胃蛋白酶将完整的IgG水解为Fc和F(ab’)2片段，并上样到FabsorbentTM F1P HF层析柱中，工艺参数如下表所示： 层析柱： CV=10mL 层析填料： FabsorbentTM F1P HF 流速： 250cm/h 平衡液： 25mM Tris-HCl, pH 8.0 洗脱液： 50mM sodium citrate, pH 3.0 清洁： 0.5M NaOH 由图1的层析图谱和图2的SDS-PAGE电泳图谱可以看出，FabsorbentTM F1P HF可以高效捕获料液中的F(ab’)2片段，经洗脱后，得到高纯度的F(ab’)2分子，层析前添加的胃蛋白酶可被有效去除。 图1：FabsorbentTM F1P HF捕获F(ab’)2的层析图谱 图2：SDS-PAGE电泳图谱（Lane 1是molecular weight marker；Lane 2是IgG标准品；Lane 3是胃蛋白酶水解后料液；Lane 4是流穿和淋洗液；Lane 5是洗脱液。） 应用案例2：FabsorbentTM F1P HF捕获CHO表达的Fab抗体片段 在该应用案例中，研究人员使用CHO细胞表达Fab抗体片段，细胞收获液经澄清后，上样到FabsorbentTM F1P HF层析柱中，工艺参数如下表所示： 层析柱： 10mm×5cm，CV=4mL 层析填料： FabsorbentTM F1P HF 流速： 300cm/h，上样流速50cm/h 平衡液： 50mM sodium phosphate, pH 8.0 上样： 澄清后的CHO细胞收获液（含Fab），pH 8.0 洗脱液（测试1）： 50mM sodium citrate, pH 3.0 洗脱液（测试2）： 50mM sodium acetate, pH 4.0 淋洗液（测试3）： 50mM glycine-NaOH, pH 9.0 洗脱液（测试3）： 50mM sodium acetate, pH 4.0 清洁： 0.5M NaOH 测试还研究了不同的洗脱工艺条件，测试1采用了pH 3.0的等度洗脱方式，测试2采用了pH 4.0的等度洗脱方式，测试3先采用pH 9.0的甘氨酸缓冲液进行上样后的淋洗，随后用pH 4.0的醋酸盐缓冲液进行等度洗脱。 由图4的SDS-PAGE电泳图谱可以看出，FabsorbentTM F1P HF可以有效捕获细胞收获液中的Fab抗体片段。三种洗脱方式均可以确保大于90%的目标Fab纯度，且回收率极高。其中，在测试2的洗脱条件下，Fab纯度和回收率最高。在测试3的条件下，洗脱前使用pH 9.0的甘氨酸缓冲液淋洗能去除少量非特异性结合的杂质蛋白。 图3：FabsorbentTM F1P HF捕获Fab的层析图谱（测试2） 图4：SDS-PAGE电泳图谱（Lane 1是molecular weight marker；Lane 2是纯化后的Fab对照品；Lane 3澄清后的CHO细胞收获液；Lane 4是测试1的流穿液；Lane 5是测试1 的洗脱液；Lane 6是测试2的流穿液；Lane 7是测试2的洗脱液；Lane 8是测试2的再生液（citrate, pH 3.0）；Lane 9是测试3的流穿液；Lane 10是测试3的淋洗液；Lane 11是测试3的洗脱液。） 应用案例3： FabsorbentTM F1P HF捕获E.coli表达的VL抗体片段 在该应用案例中，研究人员使用E.coli表达VL抗体片段，经细胞裂解和澄清后，直接上样到FabsorbentTM F1P HF层析柱中，工艺参数如下表所示： 层析柱： CV=1mL 层析填料： FabsorbentTM F1P HF 流速： 保留时间=3min 平衡液： 25mM Tris-HCl, pH 9.0 洗脱液： 50mM sodium citrate, pH 3.0 清洁： 0.5M NaOH 由图5的层析图谱和图6的SDS-PAGE电泳图谱可以看出，FabsorbentTM F1P HF可以有效捕获复杂料液中的VL抗体片段，大量杂质蛋白在上样和淋洗过程中被去除，经洗脱后，可以得到纯度极高的目标分子VL。 图5：FabsorbentTM F1P HF捕获VL的层析图谱 图6：SDS-PAGE电泳图谱（Lane 1是molecular weight marker；Lane 2是澄清后的E.coli裂解液；Lane 3是流穿液；Lane 4是淋洗液；Lane 5是洗脱液；Lane 6是清洁液。） FabsorbentTM F1P HF亲和层析填料的技术参数 配基： 化学合成的三嗪类配基 基架： 粒径均一的高交联琼脂糖（PuraBead® 6HF） 平均粒径： 90±10µm 结合载量： Human Fab: 20mg/ml adsorbent Human IgG: ≥40mg/ml adsorbent 操作流速： up to 500cm/h pH稳定性： 3-13（三个月以上的长期测试数据） 清洁/消毒： 0.5-1M NaOH, 25℃ 保存： 20%乙醇，2-30℃ FabsorbentTM F1P HF亲和层析填料产品信息 散装填料 货号 产品名称 规格 3904-00025 FabsorbentTM F1P HF 25 mL 3904-00100 FabsorbentTM F1P HF 100 mL 3904-00500 FabsorbentTM F1P HF 500 mL 3904-01000 FabsorbentTM F1P HF 1 L 预装柱 货号 产品名称 规格 6632 FabsorbentTM F1P HF Column Kit, 4 x 1 ml 4 x 1 ml预装柱 6633 FabsorbentTM F1P HF Column Kit, 4 x 5 ml 4 x 5 ml预装柱 2233 FabsorbentTM F1P HF PuraPlate 96孔板 参考资料： S. Kittler et al., Protein L-more than just an affinity ligand, 2021 Brochure: Purify and capture of antibody fragments with a new synthetic ligand affinity adsorbent FabsorbentTM F1P HF, Astrea Bioseparations Technical Note: Fab and F(ab’)2 fragment purification from CHO cell culture supernatant using Fabsorbent™ F1P HF, Astrea Bioseparations Technical User Guide: FabsorbentTM F1P HF, Astrea Bioseparations Astrea Bioseparations于1987年孵化自剑桥大学，拥有超过30年层析介质研发和生产经验，是世界级层析介质产品与服务供应商。目前使用Astrea的产品已有超过21个生产工艺通过了FDA和EMA的批准。Astrea Bioseparations在全球拥有3个研发和生产基地，专注为生物大分子和CGT领域提供行业领先的层析介质和技术服务。Astrea Bioseparations推出的基于纳米纤维的新型层析技术，解决了传统生物分离工具载量低和工艺耗时问题，实现更快、更环保、更具成本效益的纯化过程，完全符合当今生物治疗创新的需求。 西美杰是Astrea Bioseparations中国区代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎随时拨打西美杰客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>新年首发 I Pfanstiehl 重磅推出注射级甘氨酸Glycine (G-140)
甘氨酸是结构最简单的氨基酸，学名氨基乙酸，分子式为C2H5NO2。常温下是白色结晶或结晶性粉末，味甜。它极易溶于水，在乙醇、丙酮这些有机溶剂里也能溶解，展现出较好的亲水性。甘氨酸分子内既有酸性羧基（-COOH），又有碱性氨基（-NH2)，这使其既能和酸反应，也能与碱反应，在不同的pH环境呈现出多样的离子化状态，缓冲能力出色。因其特点，甘氨酸在医药辅料制剂中应用广泛，并具有诸多优势，如以下应用：缓冲剂： 甘氨酸分子的两性离子特点，使其在不同的pH环境能稳定溶液酸碱度，让制剂环境维持稳定，保障药物活性成分不受酸碱性变动影响，这对生物制品、酶类药物等对pH敏感的药物制剂极为关键。增溶剂：甘氨酸亲水性良好，能够和难溶性药物分子相互作用，降低药物分子之间的聚集，让药物以分子或离子态分散，增加其在溶剂里的溶解度，有助于难溶药物制成溶液剂。 稳定剂：在蛋白类、多肽类药物制剂里，甘氨酸能够优先与周围水分子结合，减少药物分子的水化层干扰，防止药物因聚集、变性而失活，能很好的维持这类生物大分子药物的稳定性。但甘氨酸在应用于医药辅料时也有其局限性，如在应用于冻干制剂时，容易发生结晶形态异常，在与其他辅料一同使用时，会改变整个冻干体系的塌陷温度；在被用于调节注射剂渗透压时，使用不当会容易导致渗透压过高等。尤其是，甘氨酸作为药用辅料对纯度要求极高，甘氨酸原料中的杂质，哪怕是微量存在，进入人体后也能引发免疫反应或毒副作用。提纯甘氨酸达到注射级标准，技术难度大且成本高，所以一定程度限制了它在药用制剂中的大规模应用。Pfanstiehl秉承一贯高品质理念，为满足全球生物制药行业对于高品质甘氨酸的需求，隆重推出注射级甘氨酸Glycine (G-140), 具有超高纯度，超低内毒素，超低金属残留的特点，单独检测29种金属离子，并且新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶和脂肪酶，亚硝酸盐等多项质量指标的检测，符合多国药典规定（USP, EP, BP, JPE, ChP），可用于生物治疗性药物和疫苗的生产。 产品信息： · 产品名称:Glycine, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals, USP, EP, BP, JPE, ChP (G-140)· 中文名称：甘氨酸· 分子式：C2H5NO2· 分子量：75.07 g / mol· CAS号：56-40-6· 产品货号：G-140产品特点：· 超高纯度，超低内毒素，超低微生物含量，超低金属杂质残留· 质量指标新增DNA，RNA，DNA酶，RNA酶，脂肪酶和亚硝酸盐检测· 符合多国药典：USP, EP, BP, JPE, ChP· 符合ICH Q3D标准· 符合GMP标准· 美国DMF和中国CDE药用辅料登记工作进行中产品应用：· 缓冲剂· 稳定剂· 增溶剂如果您对Pfanstiehl注射级别Glycine G-140感兴趣，欢迎联系Pfanstiehl 中国区代理北京西美杰科技有限公司获得如下详细的产品概况说明文件和测试样品。 Pfanstiehl Inc.其他产品系列如下，欢迎联系北京西美杰获取100g装免费样品。北京西美杰科技有限公司为Pfanstiehl中国代理，为客户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎拨打西美杰客服电话400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>【技术在线】HCP ELISA方法验证——加标回收（Spike & Recovery）
前言 在ELISA试剂盒的使用过程中，确保结果的准确性至关重要。为了有效识别样品配方与试剂盒组分之间的兼容性，加标回收这一关键验证试验显得尤为重要。它不仅是评估ELISA试剂盒准确性的重要工具，也是满足法规和药典（如ICH或FDA指南等）对商品化ELISA试剂盒方法学验证要求的可靠方式。 什么是加标回收？ 加标回收就是将已知量的标准品添加到样品中（“加标”，spiking），通过对比加入前后的检测结果，评估“回收”（recovery）测量值的准确性。这一过程可以揭示样品及其缓冲液中某些成分是否会干扰检测结果。目前，影响ELISA试剂盒定量结果的常见因素包括极端pH、去污剂、有机溶剂、高蛋白质浓度以及高盐浓度等。因此，在进行加标回收实验之前，确保排除这些干扰因素是至关重要的。 如何判定干扰因素？ 样品或缓冲液中的某些成分可能会影响HCP或其他杂质的检测与定量，导致回收结果的高估或低估，由此说明样品中存在干扰因素。同样，上游收获物和过程样品的基质中也可能存在疑似干扰 ELISA 检测的成分。 在有干扰的情况下，实验结果通常表现为回收率偏低。但是，如果药物本身或其他基质组分与捕获或检测抗体有相互作用，则可能表现为回收率偏高。 此外，非特异性干扰，如试剂与孔板的结合，也会导致OD值偏高。通过合理控制实验流程，可以找出具体的干扰因素。 何时进行加标回收实验？ 在进行加标回收实验前，需要先完成样品的稀释线性分析，只有明确了最低需求稀释倍数（MRD），加标回收分析才有意义。（稀释线性分析的详细内容请参考《HCP ELISA方法验证——稀释线性dilution linearity》） （Tips：每种类型的样品基质都需要进行加标回收分析。同时如果实验步骤进行了优化，则需要重复此实验以确保检测的有效性。） 如何执行加标回收分析？ 样品制备： 加标样品：可以设定3-4个不同浓度的标准品加入到不同类型待检样品中，制备成加标样品，需要注意的是加标样品的浓度需在满足MRD的条件下进行分析，也就是最低加标浓度不能低于LOQ的两倍。 对照样品：按相同体积比在每种待检样品中加入样品稀释液，制备成对照样品，用于测定样品本底的HCP浓度。 实验过程： 使用ELISA试剂盒同时检测加标样品和对照样品，每个样品最好做3个重复孔，以计算均值。 结果分析： 回收率计算公式： 如下表案例所示，我们使用大肠杆菌HCP ELISA试剂盒（F410）分别检测加标样品（100 ng/mL标准品与样品按1:4体积比混合，加标浓度为20 ng/mL）和对照样品（样品稀释液与样品按1:4体积比混合），通过测得的HCP浓度计算出回收率为95%。依据ICH、FDA及EMA等分析方法验证指南要求，HCP加标回收率的可接受范围应在75%~125%。 为了方便您快速了解如何用4倍稀释法制备加标样品和ELISA布板的详细步骤，请观看以下操作视频。加标回收问题排查 如果加标回收数据显示出明显的产物或基质干扰，您可能需要通过进一步稀释样品或置换缓冲液等方式来获取准确的检测结果。理想情况下，请选择与标准品相同的稀释液进行样品稀释，这样可以最大限度地减少偏差。在某些情况下，调整检测方法也许能提高特定样品类型的准确性，但请务必谨慎操作，以免影响结果的可靠性。 为了全力支持客户进行加标回收验证及方法学开发，Cygnus为每款ELISA试剂盒都配备了相应的标准品，详情请查阅下表。货号品名规格适用的试剂盒货号F553H-1CHOHCP Antigen Concentrate, 3G400 µlF550-1F1048XCHO Lysate HCP AntigenConcentrate200 uLF1045F1023XE.coli HCP 2G Antigen Concentrate200 uLF1020F1063XBL21(DE3) HCP AntigenConcentrate200 µlF1060F653SXHEK293 Antigen Concentrate250 µlF650SF1043XSf9 HCP 3G AntigenConcentrate200 µlF1040F1018XP.pastoris HCP Antigen Concentrate200 µlF1015F143UP. pastoris AntigenConcentrate200 µlF140/F640F978XVeroCell 2G HCP Antigen Concentrate400 µlF975F1058XPER.C6 HCP 2G AntigenConcentrate200 µlF1055F1033XSP2/0HCP 2G Antigen Concentrate200 uLF1030F998XPG13 HCP AntigenConcentrate200 uLF995F493GL.lactis HCP Antigen Concentrate 200 µlF490F233GA549 Antigen Concentrate200 µlF230F813XHeLaAntigen Concentrate1 mlF810F803XMDCK Antigen Concentrate1 mlF800F513GBHKHCP Antigen Concentrate1 mlF510F227CNS/0 Antigen Concentrate1 mlF220F453XP.fluorescens Antigen Concentrate1 mlF450F823XCAP® Antigen Concentrate400 µlF820F1028XC1HCP Antigen Concentrate200 uLF1025F603XProtein A AntigenConcentrate250 µlF600F613XProteinA Antigen Concentrate250 µlF610F403HProtein A AntigenConcentrate200 µlF400F044ProteinA Concentrate200 µlF050/F050HF740-CAmsphere™ A3 Ligand Protein A Control250 µlF740F968XAvantorJ.T.Baker® BAKERBOND® PROchievA™ Protein A Antigen Concentrate250 µlF965F743XAmsphere™ A3 Ligand Protein A Antigen Concentrate300 µlF740F1068XProteinL Antigen Concentrate200 µlF1065F963XEndonucleaseGTP® AntigenConcentrate500 µlF960F031GBSAAntigen Concentrate1 mlF030虽然加标回收可以验证HCP ELISA的准确性，但这只是整体方法学验证的一部分。完整的验证过程仍需包括精密度、LOD、LLOQ、ULOQ和HCP抗体覆盖率等分析。Cygnus针对每一种检测试剂盒均提供相应的QS（Qualification Summary）文件，如有需求欢迎点击这里填写信息索取，或直接联系Cygnus中国总代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA试剂盒的过程中遇到任何问题，我们的技术支持团队将竭诚为您提供解决方案和建议。Cygnus Technologies专注为生物技术和生物制药行业提供产品和分析方法超过25年，旨在加速研发阶段和提高产品质量。Cygnus开发和生产的生物工艺残留试剂盒，用于检测超过50种不同表达系统的特异性杂质。Cygnus作为专注于生物技术应用免疫检测的高灵敏度分析技术的专家，其产品和服务已经被全球超过95%以上生物制药公司使用，并获得FDA、NMPA、EMA等监管机构的广泛认可。北京西美杰科技有限公司作为Cygnus在中国总代理，与国内众多知名药企，CRO/CMO企业建立了长久稳定的合作关系。多年来西美杰的产品及服务帮助许多企业加速R&D阶段，提高药物质量、纯度和安全，加速优化研发工艺，减少产品上市时间，降低QC成本。如您对上述产品感兴趣，欢迎致电西美杰客服热线400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>
前言 离子交换色谱法是一种重要的生物化学分离技术，它基于带电分子与固定相之间的相互作用，广泛应用于蛋白质分析，使得通过酸碱变体推导蛋白相关降解途径成为可能，并为相关的质量控制和分子优化提供指导数据。而在蛋白质分析过程中，离子交换色谱法方法开发是非常困难的,这受困于每个蛋白的空间结构和氨基酸排列截然不同，这种跳跃式的变化使得每种蛋白拥有不同的等电点与唾液酸或糖基化程度，这大大增加相关方法开发的困难程度，此开发的关键步骤包括多步：选择合适的离子交换介质、优化缓冲体系、确定洗脱条件、调整流速和柱温等。这些步骤确保了离子交换色谱法在蛋白质分析中的有效性和可靠性，但繁琐的方法开发步骤也为试验带来极大的时间成本，间接的增加投入成本，且伴随着方法开发失败的风险，这成为蛋白药物分析领域迫在眉睫的问题。舟帆生物已经开发出关于离子交换色谱法的通用流动相，并取得了令人鼓舞的进展。由于样品中各组分的电荷性质、大小、形状和疏水性等都会影响离子交换色谱的过程和结果，选择合适的离子交换介质和缓冲体系尤为重要。离子强度、pH值、温度和流速等色谱条件的优化需要通过实验来确定，并且离子交换色谱法中离子强度和pH值的微小变化都可能导致分离效果的显著差异。在日常配制关于离子交换色谱法流动相时精确控制这些参数是实现稳定和重复性分离的关键。然而，在实际操作中，由于缓冲液的制备和使用过程可能会引入误差，通常导致色谱峰保留时间的迁移等问题。为了解决上述问题，舟帆生物自主开发并优化出了一款用于离子交换色谱法的通用流动相，该产品综合考虑了分析成本和时间效率，在离子色谱方法开发过程中兼具了分离效率、分析时间和成本，提供了一种高效、经济且通用的离子交换色谱流动相的选择。 材料与方法 仪器、色谱柱 安捷伦1260 高效液相色谱系统ThermoProPac™ WCX-10 HPLC 10μm 4×250mm色谱柱样品 实验中用到的样品包括8个蛋白药物样品均来自合作方浙江大学药学院生物药制剂与分析团队。IEC-HPLC参数 下表列出了使用ZF-LC-0002流动相A&B（10×）进行IEC-HPLC液相分析的色谱参数：实验参数 将8种蛋白稀释到1mg/mL,并使用CpB酶酶切，酶切后的样品10000 rmp/min离心十分钟取上清液进样检测。结果 见图1。图1. 8 种蛋白药物的IEC-HPLC 色谱图 结论 开发出一种离子交换色谱法通用的流动相，在8种蛋白药物样品的分析中使用简单的洗脱条件即可对蛋白分子的酸性变体和碱性变体达到较好的分离，为离子交换色谱法相关的方法开发提供了一项优异选项，可以为企业和相关研究单位大大缩短方法开发时间和投入。产品订购信息 货号 品名 规格 ZF-LC-0002IEC-HPLC通用流动相（10×）盒（含A液、B液各1000mL) 试用申请 IEC-HPLC通用流动相试用装火热申请中，如您对上述产品感兴趣，请关注“西美杰微信公众号”，发送关键词“IEC”，填写问卷即可获得免费试用机会，数量有限，先到先得！品牌介绍 杭州舟帆生物科技有限公司成立于2018年，拥有一支高效的研发团队，是一家专注于生物科技领域的公司。公司在蛋白质药品工艺开发和优化、分子诊断等领域拥有丰富的经验和技术优势。我们的产品包括商业化毛细管凝胶电泳检测试剂盒、高效液相色谱离子交换检测试剂盒、细胞培养试剂、分子诊断试剂等。这些产品广泛应用于生命科学研究、药物开发等领域，与众多知名研究机构和企业建立了紧密的合作关系，共同推动生物科技的发展和应用。北京西美杰科技有限公司是舟帆生物总代理，始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务。如果您对上述产品感兴趣，欢迎致电北京西美杰客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多产品信息。
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抗体亲和提取(AAE™)：革新宿主细胞蛋白(HCPs)分析的新篇章
在生物制药领域，对宿主细胞蛋白(HCPs)的精准分析与控制是确保药物安全与有效性的关键环节。各国法规都有关于HCPs的论述，要求必须对生物药品进行分析和纯化，以将宿主细胞蛋白HCPs降低到可接受的水平。 不同监管机构宿主细胞蛋白(HCPs)法规要求: 《中国药典》(2020版)三部规定：针对CHO细胞，HCPs残留需要<0.05%(相当于小于500ppm)；针对E.coli，HCP残留需要<0.01%。 美国药典USP<1132>章节规定：用一种灵敏度较高的方法检测药品中的HCPs，其含量应该低于检测限(通常小于100ppm，即1mg总蛋白中HCPs含量应小于100ng，也即<0.01%)。 欧洲药典EP 2.6.34中规定：在生物制品中，HCP的含量应当小于0.1%。 国际人用药品注册技术协调会(ICH)指南：ICH Q6B指出，需要根据ICH准则采用敏感且经过验证的有效方法来监控残留的HCPs，其残留量通常要求小于100ppm。ELISA是各国药典推荐的在生物制品中检测残留HCPs的方法，可以测定HCPs的总量。并且ELISA的操作简便，是经典的免疫学检测方法。但ELISA检测HCPs也有方法的局限性，比如不能从ELISA的结果中知道样品中有哪些HCPs，或者用于检测的抗体与哪些HCPs发生了免疫反应。因此，监管部门要求在使用ELISA检测过程中HCPs残留含量时，不仅要通过方法学验证证明试剂盒的准确度，精密度，灵敏度等，而且还需要证明使用的HCPs抗体有广泛的反应性，即HCPs抗体覆盖率。图 1 HCP ELISA试剂盒检测流程 什么时候做HCPs抗体覆盖率验证？ 美国药典USP<1132>和欧洲药典EP2.6.34. HOST-CELL PROTEIN ASSAYS将HCPs检测方法分为：商业化试剂盒、产品/工艺专属性方法和平台化方法。并指出在产品开发的不同阶段，推荐采用不同的ELISA试剂盒用于HCPs的检测。 USP<1132>提到在没有平台化方法的情况下可以在临床前、临床I期、II期使用商品化试剂盒；在临床III期/工艺验证及产品上市后，由于商业化的通用HCP检测试剂盒抗体的覆盖率往往不足等局限性，需要考虑结合细胞类型及工艺特异性等因素，使用平台化方法或针对上游工艺开发的产品/工艺专属性方法。 而在临床II期后若是需要继续使用商品化试剂盒，就需进行HCPs抗体覆盖率验证来评估试剂盒是否可以继续用于质量监控。通常推荐在临床II期末或者临床三期前的这个阶段去做覆盖率验证，此时生产工艺已经固定并且有相对充足的时间。 图2 USP <1132>产品开发的不同阶段HCP检测方法的建议 HCP覆盖率验证的不同技术路线 传统的分析方法采用2D Western blot进行覆盖率验证，是基于等电点和分子量不同的原理，蛋白在凝胶上通过SDS-PAGE方法被分离。其中一张胶被银染，另一张被转到PVDF膜上，并结合ELISA试剂盒中的抗体进行Western Blotting检测。但因其固有的方法学限制和技术挑战，往往难以全面、准确地评估多克隆抗体对HCPs的覆盖范围。 2D WB方法限制因素： 负载能力低 样品经过前处理会破坏蛋白天然表位 HCPs结合到PVDF膜上导致损失部分检测到的抗体信息 难以完全将PAGE凝胶与WB图片对齐 特异性差，显著低估真实抗体覆盖率 为了克服这一难题，Cygnus Technologies于2014年创新性地推出了抗体亲和提取(Antibody Affinity Extraction，AAE™)技术，目的是提高细胞培养收获液中总HCPs混合物的灵敏度和覆盖率评估，并可以检测对下游工艺特异性HCPs的反应性，这些通常也是最为关注的HCPs。与2D-PAGE和2D-WB的灵敏度受负载能力等限制不同，AAE™的灵敏度可高出100倍以上，因为它能够提取和浓缩大量样品。 表 1 AAE与2D-WB覆盖率技术路线对比 AAE 2D-WB 灵敏度 可富集mg级HCPs 灵敏度高(>95%) 因WB方法的局限性，覆盖率被低估 灵敏度低(50-70%) 特异性 无变性处理特异性高(>99.5%) 抗原变性处理后特异性结合低(50-80%) 覆盖率 AAE+2D-PAGE 60-90% AAE-MS 70-95% 50-70% 适用性 纯化前和纯化后均可 只是适合纯化前样品 AAE分析流程首先将多克隆抗体共价固定在色谱柱上。然后对色谱柱进行条件调节，以防止抗体的显著浸出并极大地减少任何非特异性结合。原始未变性的HCPs样品通过色谱柱与抗体进行结合，随后用酸洗脱。通过结合和洗脱，HCPs样品再次在柱上循环，直到没有其他HCPs被结合。所有收集的HCPs洗脱液再汇集、交换缓冲液并浓缩回原始样品体积，为后续的分析提供高质量的样本。在收集到HCPs样本后，可以选择通过2D-PAGE+银染或MS质谱进行后续分析。 图3 USP <1132>产品开发的不同阶段HCP检测方法的建议 抗体对下游HCPs的反应性和AAE-MS™的HCPs鉴定 AAE™技术的优势不仅在于其高灵敏度，更在于其强大的预测能力和广泛的应用前景。通过AAE-MS™获得的覆盖率的结果更高、更真实，可以更准确地预测抗HCPs抗体在ELISA中的表现。并且，AAE™与质谱联用(AAE-MS™)能够识别收获材料中与抗体反应的HCPs，并获得蛋白质的分子量和等电点(pI)信息，可以评估纯化过程中持续存在的单个HCPs，并优化下游纯化工艺。 图4 F650S HEK2 93抗体覆盖率验证 值得一提的是，AAE™技术在检测并证明对单个下游HCP的反应性方面表现出色。更主要的是质谱可以对样品中是否存在潜在高风险的HCPs做出鉴定并提供这些蛋白的注释信息。通过AAE™技术，能够更准确地识别和量化这些高风险HCPs。这些通过特定纯化过程持续存在的高风险HCPs对于患者安全、药物功效和稳定性至关重要，无论是药物研发人员还是监管人员都能通过这一技术清楚地了解工艺中某个HCP的残留情况，从而为药物的研发和生产提供强有力的支持。 表 2 CHO细胞高风险HCPs 高风险蛋白（CHO） PRE F550 F550-1 pl MW 78 kDa glucose regulated protein (BiP,HSPA5) N Y Y 5.07 72379.1 Cathepsin B(CTSB) Y Y Y 5.73 35646.9 Cathepsin D Y Y Y 6.54 44110.9 Cathepsin E N N N 4.61 42726.4 Clusterin Y Y Y 5.58 51557.5 Glutathione S transferase P N Y Y 7.64 23638.2 Matrix Metalloproteinase 19 Y Y Y 7.71 58942 Monocyte chemoattractant protein 1(MCP-1) Y Y Y 9.32 15858.4 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Y Y Y 9.59 23634.4 …. AAE-MS™在药物原液和过程样品监控中的应用 AAE-MS™也可以对药物原液中HCPs富集的同时去除了大部分原料药。去除原料药极大地提高了通过2D-PAGE和质谱分析识别单个HCPs的能力，因为药品通常以104-106的倍数掩盖HCPs。AAE-MS™是一种更客观和直接的方法检测和鉴定原料药中任何潜在的HCPs杂质以帮助优化下游纯化工艺。 图5 AAE对药物原液中HCPs的富集 图6 AAE-MS™对药物原液中高风险HCPs的富集和鉴定总之，抗体亲和提取(AAE™)技术以其卓越的性能和广泛的应用前景，正在逐步成为生物制药领域HCPs分析的新标准。它不仅能够克服传统方法的局限性，更在灵敏度、预测能力和应用深度上实现了显著提升。随着技术的不断发展和完善，相信AAE™将在未来为更多药物的研发和生产贡献力量，为患者带来更加安全、有效的治疗方案助力。 支持文献 [1] USP <1132> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals. [2] USP <1132.1> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry. [3] EP-2.6.34. Host-Cell Protein Assays. [4] Host Cell Protein Analysis: Immunoassays and Orthogonal Characterization By Antibody Affinity Extraction and Mass Spectrometry Methods [5] Antibody Affinity Extraction (AAE™) - A superior alternative to 2D Western blot for determination of polyclonal anti-HCP reactivity. [6] Antibody Affinity Extraction (AAE™) Empowers HCP Identification by Mass Spectrometry. 更多>
一般来讲，偶联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC, RRX, TR, PE, Rhodamine）和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验，对于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使Biotin/Avidin检测系统。其中荧光素是具有光致荧光特性的染料，荧光染料种类很多，目前常用于荧光标记二抗的主要有以下几种： 异硫氰酸荧光素-Fluorescein Isothiocyanate (FITC) FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。由于FITC是小分子化合物，每一个抗体可标记几个FITC分子，IgM通常用小分子的荧光素标记，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。FITC荧光二抗主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。然而FITC的缺点是淬灭快，因此要和抗淬灭剂一起使用。 四甲基异硫氰酸罗丹明-Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate(TRITC)，Rhodamine Red-X(RRX), Texas Red(TR) 这些罗丹明的衍生物耦联基团具有不同的吸收波长 (550, 570, 596nm)和最大发射波长（570, 590, 620nm）。在使用装有氪氩灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记的实验时，RRX尤其有用，可以和Cy2(或者FITC)和Cy5一起使用，因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间，而且和这两者覆盖都很少，氪氩灯激发光为488nm，598nm和647nm，分别是Cy2(FITC), RRX和Cy5的理想激发波长。因为FITC和PE可以被氩灯的488nm波长激发, 在流式细胞仪中用FITC作双标，另一种用藻红蛋白（PE）耦联基团要比罗丹明好。TRITC为罗丹明的衍生物，呈紫红色粉末，较稳定，最大吸收光波长为 550nm，最大发射光波长为620nm，呈现橙红色荧光，与FITC的绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因TRITC荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。 菁类染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5) Cy2耦联基团激发波长为492nm，发光波长为510nm的绿色可见光。Cy2和FITC使用相同的滤波片。由于Cy2比FITC在光下更稳定，要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂，因为这种抗淬灭剂和Cy2反应，在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm，最强发射光为570nm。因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中，可使用和TRITC一样的滤波片。Cy3在氩光灯（514nm或528nm）下可以被激发出50％的光强，在氦氖灯（543nm）或者汞灯（546nm）下则约75％。Cy3可以和荧光素一起作双标。Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。Cy5耦联基团的激发波长最大650nm，发光波长最大670nm。在氪氩灯（647nm）下它们可被激发出98％的荧光，在氦氖灯下（633nm）为63％。Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。由于它的最大发射波长在670nm，Cy5很难用裸眼观察，而且不能用汞灯作理想的激发。通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜，在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。使用传统的表面荧光显微镜时，不推荐使用Cy5。注：由于观察荧光需要一定波长的激发光，必须根据实验室已有的仪器可发光的波段进行选择。另外注意多标记中对探针色彩区分程度的要求，例如，若丹明红-X (RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明（TRITC）或者Cy3的区别明显。如果对灵敏度有更高的要求，则Cy3和Cy5就比其他的荧光团探针要亮。 西美杰代理的全球知名二抗和底物生产厂商LGC·Seracare·KPL提供丰富的荧光标记二抗，可检测抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类等物种；另外，还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同类型抗体。小编下面汇总了部分常用荧光二抗：FITCTRITCCy3Cy5抗人5230-02885230-0288-5230-0370抗小鼠5230-04275230-03365230-03645230-0376抗兔5230-02985230-03325230-03595230-0372抗山羊5230-0294-5230-03585230-0371抗绵羊5230-0324---抗鸡5230-0325--5230-0379抗鸭5230-0326---抗狗5230-0314---抗猫5230-0317---链霉亲和素5270-0028 -5270-0022 -注：表格数字部分为产品货号如对西美杰代理的LGC·Seracare·KPL产品感兴趣欢迎拨打西美杰客服热线400-050-4006或登录官方网站www.xmjsci.com了解更多信息。
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标记核苷酸是生命科学研究的一类关键试剂，是分子生物学研究中用于检测和标记特定核酸序列的有效工具，通常通过酶反应将标记核苷酸插入到DNA或RNA序列中进行检测和分析。而荧光基团和半抗原是最常用的非放射性DNA/cDNA探针标记物。 Nick translation是基因组DNA、质粒、BAC克隆等生成标记DNA探针（100-500bp）的首选方法。它是基于DNA酶I(introduction of random single-strand breaks (“nicks”)和聚合酶I的协同反应，聚合酶I在“nick”位点结合标记的dUTP，而不是其天然对应物dTTP，从而创造出理想的原位杂交探针。 西美杰代理的Jena Bioscience品牌提供了有丰富的DNA/cDNA标记产品，包括荧光标记和半抗原标记，如下表所示:Fluorescent
Nick Translation Labeling Kits 品名 货号 规格 Atto425 NT Labeling Kit PP-305S-425 10 reactions Fluorescein NT Labeling Kit PP-305S-FAMX 10 reactions AF488 NT Labeling Kit PP-305S-AZ488 10 reactions Atto488 NT Labeling Kit PP-305S-488 10 reactions Cy3 NT Labeling Kit PP-305S-CY3 10 reactions Atto550 NT Labeling Kit PP-305S-550 10 reactions AF555 NT Labeling Kit PP-305S-AF555 10 reactions TexasRed NT Labeling Kit PP-305S-TXR 10 reactions AF594 NT Labeling Kit PP-305S-AF594 10 reactions Atto647N NT Labeling Kit PP-305S-647N 10 reactions AF647 NT Labeling Kit PP-305S-AF647 10 reactions Atto680 NT Labeling Kit PP-305S-680 10 reactions Biotin & Digoxigenin Nick
Translation Labeling Kits 品名 货号 规格 Biotin16 NT Labeling Kit PP-310S-BIO16 10 reactions Digoxigenin NT Labeling Kit PP-310S-DIGX 10 reactions
北京西美杰科技有限公司为Jena Bioscience中国代理，为客户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎拨打西美杰客服电话400-050-4006或者登陆网站 西美杰代理的Jena Bioscience由德国马普所(MPI)的知名分子生物学家于1998年共同创办，致力于为全球的科研院所，医院，制药企业和诊断试剂盒生产企业提供各类试剂与原料, 供应特色标记核苷酸/类核苷，标记荧光探针、点击化学、蛋白结晶等产品，分别通过DIN EN ISO 9001，DIN EN ISO 14001，EMAS认证，质量被80多个国家客户认可。 品牌优势： 以核苷，核苷酸类似物为特色的产品 种类齐全：核苷，核苷酸及类似物，蛋白及蛋白表达系统，点击化学试剂，生物大分子结构研究相关试剂，分子生物学和生物化学相关试剂 强大的技术团队可提供高质量定制服务 产品质量有保障，通过多种认证 产品和服务被80多个国家客户认可 主要产品分类： 核苷、核苷酸类似物： 标记核苷酸、脱氧/双脱氧核糖核苷酸、核苷酸类似物 点击化学：带有点击基团的核苷酸、荧光素、生物素、ATP类似物等； 蛋白结构相关产品：蛋白结晶条件筛选试剂盒、蛋白结晶耗材 分子生物学：不同要求PCR试剂盒及单组分产品，DNA LEEDER，限制性内切酶、TAE、TBE
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【技术在线】HCP ELISA方法验证——稀释线性dilution linearity
稀释线性（dilution linearity）是验证HCP ELISA方法特异性和准确性的关键实验之一，本文详细解读了HCP ELISA方法学验证中有关稀释线性的操作方法与注意事项，欢迎了解。 更多>Mirus Bio新上市转染试剂TransIT®-AAViator，基于逆向工程，最大化的提升AAV滴度和实心率！
腺相关病毒 (AAV) 是基因治疗中最广泛使用的传递/递转机制。近年来，基于AAV病毒所开发的基因疗法研发及临床试验注册数量也呈指数级增长，也需要AAV病毒生产工艺及产能的不断优化及扩展，从最早基于贴壁细胞工艺升级转换到以悬浮为主的200-2000L反应体系。 Mirus Bio成立于1996年，在核酸递送领域深耕多年，于2021年8月推出GMP级别TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂，支持AAV及LV从科研到GMP商业化生产。不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物聚乙烯亚胺，PEI)，Mirus Bio将专利的多聚物及脂质技术进行多重组合，形成多功能性的转染方案，克服细胞递转过程中的多重阻碍，以实现更高效转染和更低细胞毒性，从而大幅度提升多种血清型AAV病毒生产载量。去年7月底Mirus上市RevIT™ AAV Enhancer，已证明在不同AAV血清型别中，可提高AAV病毒基因组滴度1.2-4.9倍，并且在一定程度改善了实心率。更重要的是，RevIT™ AAV Enhancer不仅可以搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂，也适配于其他转染试(如PEI等)，使得AAV生产上游成本的进一步降低成为可能，进而降低了基因治疗单剂量成本。下图展示了国内客户前期测试反馈结果，测试包括了不同血清型别的质粒设计，适用于国内及国外品牌的转染试剂、细胞及培养基体系，实现了1.5-4倍以上的AAV病毒滴度提升。 RevIT Enhancer在国内客户不同AAV项目平台上的测试反馈结果 随着国内外客户项目及管线推进，已有越来越多的客户将TransIT-VirusGEN® 转染试剂以及RevIT™ AAV Enhancer从摇瓶阶段线性放大至200L-500L反应器，并且已应用到处于临床申报产品中。ReciBioPharm 与Mirus Bio合作， Chris Brown(工艺流程开发部门)在线上(链接)展示了TransIT-VirusGEN 和RevIT™ AAV Enhancer数据结果，并且比较了所有测试规模(摇瓶&反应器)，反馈病毒滴度放大效果非常好，并且实心率也保持相同水平，在 50 升的生物反应器中，也有着40%以上实心率。Chris Brown表示“选择用TransIT-VirusGEN 和RevIT™ AAV Enhancer产品，是基于我们以往的测试数据，允许最大限度地提高 AAV 产量。产量的提高，单个50 升生物反应器可生产更多剂量，从而降低单位剂量的成本。” 更多的，Bridgebio在poster中分享了基于AAV5型别，使用TransIT-VirusGEN® 转染试剂以及RevIT™ AAV Enhancer从摇瓶线性放大至200L反应体系(125mL摇瓶→2L → 10L → 200L)，病毒滴度和实心率数据结果(图1)。与原有工艺相比 (Process A：PEIPro转染 + Expi293细胞/培养基)，替换成TransIT-VirusGEN® 转染试剂后的工艺流程 (Process B：TransIT-VirusGEN® 转染试剂 + Expi293细胞 + BalanCD培养基；Process C：TransIT-VirusGEN® 转染试剂 + VP2.0细胞 + BalanCD培养基)均有着更高的病毒滴度(图2)和更低的宿主DNA和质粒DNA残留。 图1. 从125mL摇瓶线性放大至200L反应体系的病毒滴度和实心率数据结果 图2. 采用Mirus的工艺平台均有着更高的病毒滴度 Mirus Bio 并没有止步于此，并于2024年10月7日重磅推出 TransIT®-AAViator AAV转染试剂。继续沿用Mirus Bio 多聚物及脂质两组分的经典组合，不同的是应用逆向工程思维，基于现有RevIT™ AAV Enhancer，从Mirus Bio多聚物及脂质库中，分别筛选出更优化的脂质和聚合物配方。新推出的TransIT®-AAViator转染体系，进一步降低了 AAV工艺生产流程中所需质粒 DNA 和转染试剂使用量，最大限度地提高不同AAV血清型滴度和实心率，从而提升 AAV生产工艺的总体生产效率。整合TransIT®-AAViator的AAV病毒上游生产工艺，无需通过细胞密度而调整试剂和质粒DNA加入量，并且实现了单个生物反应器的生产剂量的成倍增加，大幅度降低了单位剂量的成本，为基于AAV 病毒的基因治疗开发提供了更优的解决方案。 产品详情 产品名称: TransIT®-AAViator Transfection System 上市日期：2024年10月7日 产品货号: MIR 73750 / MIR 73745 产品组分：TransIT®-AAViator转染试剂及RevIT™ AAV增强子 Mirus Bio AAV病毒生产相关转染试剂产品参数 * HDPE材质管/瓶 *只针对30 mL以及150 mL 规格试剂 **只针对150 mL 规格试剂 TransIT-AAViator®提升AAV生产效率&降低单剂量成本 生产剂量的成倍增加 随着AAV病毒滴度的提升，单个反应器所允许生产剂量也成倍的增加，从而大幅度降低单剂量成本。 减少生产所需批次 提高AAV病毒生产总产量，减少每次生产的所需批次数量或扩大生物反应器规模才可满足生产需求，缓解了由于产能不足等诸多限制。 减少质粒DNA用量 TransIT®-AAViator 转染系统，降低了至少一半质粒 DNA使用量 ，同时仍可保持高水平的滴度和实心率，进一步降低了批次生产成本。 加快工艺开发进程 TransIT®-AAViator 转染系统，只需较少实验优化，即可获得最佳结果，从而缩短了工艺开发时间，加快了产品上市速度。 TransIT®-AAViator有着更高滴度和实心率 使用不同的质粒设计(GFP基因-图3；RPE65 基因-图4)，平行比较TransIT®-AAViator 转染系统与“Poly F”(Polyplus FectoVIR® 病毒转染试剂)以及“Poly P” (Polyplus PEIpro®病毒转染试剂)。实验结果显示，在不同AAV血清型别中 (AAV5、8、9)，TransIT®-AAViator 转染系统有着更高的病毒滴度及实心率，当质粒设设计替换成治疗性基因(RPE65 基因)，病毒滴度及实心率相比于竞争品牌，其优势更加显著。 图3. 转染GFP基因质粒的AAV滴度 图4. 转染RPE65基因质粒的AAV滴度 TransIT®-AAViator降低质粒DNA用量 TransIT®-AAViator转染系统，在较低质粒 DNA 用量仍可得到高水平AAV病毒滴度及实心率（图5）。 图5. 实验使用TransIT® -AAViator转染试剂(试剂:DNA比例为1.25:1,vol:wt)，以 1:1:1 的质粒质量比转染 pAAV-WPRE-GFP (Aldevron), pAAV-Helper (Aldevron) 和 pAAV-RepCap (AAV9 Genemedi)三质粒。转染时加入RevIT AAV Enhancer（1 μl/mL），转染后 72 小时使用化学裂解法收获 AAV病毒。 TransIT-AAViator实验流程 Step 1: 转染前，需保证生长在培养基中的悬浮 HEK 293 细胞活率 > 95%。 Step 2: 转染时：建议细胞密度为 ~ 3 × 10E6 cells/mL，TransIT®- AAViator 试剂与DNA 加入比例为1:1 - 1.5:1，每 1 mL 培养基加入RevIT AAV Enhancer 0.5 - 1.5 μl；静止条件下孵育15-45 分钟，以便形成转染复合物，然后轻柔的加入细胞中。 Step 3: 转染后无需更换培养基，一般可在转染后 48-72 小时收获AAV病毒。 客户案例分享 最新线上webinar：Enhancing AAV Production: A Novel Transfection System for Cell and Gene Therapy Applications (链接) 演讲者信息： Webinar内容一览： 通过该线上Webinar，可了解TransIT®-AAViator 转染系统，包括了开发初衷、数据性能对比及展示等。来自Affinia Therapeutics 高级工艺开发 Michael White， 强调了该转染系统的可扩展性和工作流程的易整合性，是想要优化上游工艺和增加整体成本效益的理想选择。 此外，Michael White分享了 Affinia Therapeutics AAV转染平台体系纳入TransIT®-AAViator 转染系统经验，强调该系统能够降低质粒DNA用量，同时也在不同规模中进行了测试(摇瓶-3L反应器)，可稳定的保持高水平滴度，从而大幅度提高了生产工艺的效率，同时降低了AAV病毒生产成本。 讨论重点包括： Affinia 比较了新一代转染系统TransIT®-AAViator与当前使用的平台工艺； Affinia 在将TransIT-AAViator® 与其他试剂性能进行比较中，如何优化使其性能显著优于其他转染试剂； 整合TransIT®-AAViator转染系统，相比于优化前实现了3 倍滴度提升及 70% 实心率。 小结 新一代专为优化AAV 生产工艺而推出的转染试剂: TransIT®-AAViator 转染系统： 与基于单个组分(如PEI)转染试剂不同，可显著的提高不同AAV 血清型别的滴度及实心率； 有着更低转染试剂及质粒DNA使用量需求，同时保持高水平的AAV滴度及实心率； 相比于竞争品牌(FectoVIR&PEIpro等)，有着更高基因组滴度及实心率，并且质粒设计为治疗基因，其优势更加显著。 相关产品信息及链接 产品名称 规格 货号 NEW! TransIT®-AAViator Transfection System 2 x 1.5 ml MIR 73750 1 × 30 ml MIR 73745 RevIT™ AAV Enhancer 1.5 ml MIR 8000 10 x 1.5 ml MIR 8006 75 ml MIR 8080 NEW! RevIT™ GMP AAV Enhancer 200 ml MIR 8200-GMP VirusGEN® AAV转染试剂及RevIT™ AAV Enhancer For 1L of Culture MIR 8007 For 10L of Culture MIR 8008 TransIT-VirusGEN®转染试剂 0.3 ml MIR 6703 0.75 ml MIR 6704 1.5 ml MIR 6700 5 x 1.5 ml MIR 6705 10 x 1.5 ml MIR 6706 30 ml MIR 6720 TransIT-VirusGEN® GMP级别转染试剂 150 ml MIR 6845-GMP VirusGEN® AAV转染试剂(套装) 1 kit for 1 L of cell culture MIR 6750 VirusGEN® GMP级别AAV转染试剂(套装) 1 Kit - for 50 L of cell culture MIR 6815-GMP VirusGEN® LV转染试剂(套装) 1 kit for 1 L of cell culture MIR 6760 VirusGEN® GMP级别LV转染试剂(套装) 1 Kit - for 50 L of cell culture MIR 6825-GMP Mirus成立于1995年，始终秉承着为基因递转提供优化方法及高效的工具。凭借超过 25 年转染领域的深根细作，获得了多项技术突破，已成为核酸递送领域的全球领导者和值得信赖的品牌。Mirus科学家团队不断突破转染技术的极限，推出了VirusGEN®转染试剂与RevIT™增强剂，进一步提升AAV/LV产量，助力推动生物治疗药物的降本增效，为CGT领域客户赋能。 北京西美杰科技有限公司是Mirus中国区代理，始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务。如果您对上述产品感兴趣，欢迎致电北京西美杰客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多产品信息。 更多>about us关于我们
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