
Agrisera讲座 II:Western Blot精准判读与典型误区规避
为助力科研人员攻克Western Blot实验中的常见难题,西美杰携手Agrisena公司技术专家Joanna博士,共同推出【Western Blot全流程优化】系列专题...2025-11-11更多>

热烈庆祝西美杰荣获科兴“聚势·卓越贡献奖”
2025年8月28日,由北京科兴控股(集团)有限公司(以下简称“科兴集团”)主办的2025供应链生态大会在位于北京昌平的科兴来福城举办,这也是...2025-09-01更多>

Cygnus讲座邀请/宿主细胞蛋白(HCP)分析进展与质量风险控制策略
讲座时间:北京时间2025年9月4号(周四)23:00报名方式:https://globalmeet.webcasts.com/starthere.jsp?ei=1730233&tp_key=11ee2072ce&...2025-09-01更多>

热烈庆祝西美杰荣获LGC亚太区优秀合作伙伴奖项
在2025年的亚太地区渠道合作伙伴会议上,北京西美杰科技科学有限公司(以下简称“西美杰”)荣获了两项由LGC颁发的重量级奖项,分别是亚太区...2025-08-28更多>

Cygnus AccuRes™ HCD检测试剂盒特价促销
在生物制品的生产过程中,宿主细胞DNA可能会残留其中,这将会导致致癌基因或其他风险的遗传物质进入到最终的药物制剂中。为了降低这种风险,...2025-03-20更多>

PhytoTech植物组培产品促销活动
限时疯抢!PhytoTech 植物组培产品促销盛宴来袭,全场低至2折起,涵盖各类凝胶、激素、抗生素等。实惠的价格,优质的产品,西美杰常备现货,...2025-02-12更多>

Applichem 核酸污染清除试剂(A7089)特价促销
2024-12-12更多>

Applichem 分子生物学级去离子甲酰(A2156) 特价促销
2024-12-12更多>
HCP ELISA方法学验证——精密度与重复性(Precision & Reproducibility)
当我们已经验证过HCP ELISA与样品基质的兼容性,并且找到了样品的最低需求稀释度(MRD)后,那么下一步就是验证ELISA方法的精密度,进而完成法规要求的ELISA方法学验证的全部流程。 什么是精密度和重复性? 精密度是指多次检测结果之间的一致性程度,通常以实验的重复性进行评估,以变异系数(%CV)来表示。 计算公式:%CV=(标准差/平均浓度)×100% 通过此公式,可以评估两种精密度: 批内精密度:衡量单次实验内不同复孔之间的重复性。严格的批内CV表明样品读数不受加样位置或操作程序的影响。 批间精密度:衡量多次独立实验之间的重复性。确保批间CV在可接受范围内(通常<15-20%,取决于法规要求)是证明该方法能持续稳定产出可靠结果的关键指标。 法规要求 ICH Q2(R1) 方法:在3个浓度水平下至少进行9次测定,覆盖该测定的分析范围(在3个浓度下进行3次重复) 标准:未说明。 US FDA 方法:至少在3个浓度水平下进行5次测定,覆盖该测定的分析范围(在3个浓度下进行5次重复) 标准:每个浓度水平下精密度的CV%应在±20%范围内,LLOQ的CV%不应超过25%。 EMA 方法:在4种浓度下至少进行5次测定(在LLOQ、LLOQ的三倍以内、标准曲线浓度的30-50%、ULOQ的至少75%,4种浓度下进行5次重复)。 标准:每一浓度水平质控的批内和批间精密度均不应超过15%,LLOQ的CV%不应超过20%。 常见问题排查:导致CV值偏高的原因 如果实验结果的CV值高于试剂盒说明书中的预期范围,那么很可能是操作流程或设备出现了问题,我们建议您按以下步骤进行问题排查与实验优化。 洗板操作 问题原因: 过度剧烈的洗板是CV值异常偏高的常见原因,包括使用自动洗板机、用力拍板等操作,因其可能导致抗原-抗体复合物发生非特异性解离,进而造成CV值过高。 优化建议: 为实现最佳重复性,我们强烈推荐洗瓶洗板法,可以通过交替方向加入洗液来确保每个孔的清洗时间保持基本一致。有关洗板的详细操作请参考下文。 如何用正确的洗板方法解决ELISA检测结果漂移的问题? 酶标仪性能 问题原因: 当在低吸光度范围(如OD值<0.1)的检测值出现较大波动时,可能提示酶标仪存在潜在问题。光源、单色器或滤光片的故障可能导致间歇性信号异常或噪声,此类问题通常无法通过常规校准程序识别,但会对检测的灵敏度以及定量限(LOQ)和检测限(LOD)产生显著影响。该类问题常表现为在空白孔或仅含有非吸附性液体的孔中,孔与孔之间OD值读数标准偏差达到0.020或更低。 优化建议: 对于HRP-TMB显色的ELISA,推荐使用双波长读数(如检测波长450nm,参比波长650nm)。通过双波长读数法,可从检测波长(如450nm)处的信号值中扣除非特异性信号(如650nm处的背景OD值),从而提高检测结果的准确性与可靠性。该方法可以最大限度地减少因污渍或塑料缺陷引起的孔间差异,从而提升精密度与准确度。 (注:质量良好的板条在参比波长(如650nm)的OD值通常很低(平均约0.040),且孔间OD值标准差极小(约0.002)。若实际检测OD值远高于0.040且标准差大于0.004,则表明酶标仪可能存在问题。) 试剂污染 问题原因: Cygnus的ELISA试剂盒灵敏度高达pg/mL至ng/mL级别,实验室环境中潜在的高浓度分析物(如培养基、上游工艺样品中的HCP或BSA,浓度可达mg/mL级),非常容易对试剂盒中的关键组分造成污染,如果检测结果出现孔板中个别孔吸光值偏差过大,且同一个试剂盒重复后偏差数据值相似,则可能是孔板的孔、标准品或酶标抗体出现了污染。 优化建议: 尽可能在远离处理上游样品的区域内进行ELISA实验操作,避免交叉使用移液器,做好操作台面与仪器的清洁,尽可能使用带有滤芯的吸头等。 分析人员与仪器 问题原因: 操作不规范,移液器未校准或使用质量不达标的吸头,均可能对检测结果的精密度产生不利影响。 优化建议: 邀请另一位分析人员在独立实验室中使用不同设备进行平行测试,可能有助于您确定精密度不理想的原因是由于操作人员缺乏经验,还是常规实验室工具存在问题,比如移液器未校准或吸头质量差。 成功完成ELISA方法的精密度与重复性验证,是确保数据可靠、推动项目前进的基石。Cygnus针对每一种检测试剂盒均提供相应的QS(Qualification Summary)文件,如有需求欢迎点击这里填写信息索取,或直接联系Cygnus中国总代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA试剂盒的过程中遇到任何问题,我们的技术支持团队将竭诚为您提供解决方案和建议。 Cygnus Technologies专注为生物技术和生物制药行业提供产品和分析方法超过25年,旨在加速研发阶段和提高产品质量。Cygnus开发和生产的生物工艺残留试剂盒,用于检测超过50种不同表达系统的特异性杂质。Cygnus作为专注于生物技术应用免疫检测的高灵敏度分析技术的专家,其产品和服务已经被全球超过95%以上生物制药公司使用,并获得FDA、NMPA、EMA等监管机构的广泛认可。 北京西美杰科技有限公司作为Cygnus在中国总代理,与国内众多知名药企,CRO/CMO企业建立了长久稳定的合作关系。多年来西美杰的产品及服务帮助许多企业加速R&D阶段,提高药物质量、纯度和安全,加速优化研发工艺,减少产品上市时间,降低QC成本。如您对上述产品感兴趣,欢迎致电西美杰客服热线400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>基于新型纳米纤维的LentiHERO在LVV和HSV纯化工艺中的应用
溶瘤病毒如单纯疱疹病毒(HSV)和痘苗病毒因能在肿瘤细胞中选择性复制,诱导肿瘤细胞溶解和触发免疫应答的能力,而在癌症治疗领域中逐渐受到重视。同样,慢病毒载体(LVV),如伽利略病毒(GalV)和VSV-G能够通过实现细胞类型特异性转导来增强基因治疗效果。这些病毒对下游的纯化策略产生了颠覆性影响。 常用于基因治疗的病毒载体尺寸示意图:腺相关病毒AAV、慢病毒LVV、单纯疱疹病毒HSV和痘苗病毒VACV 对于这些尺寸较大的病毒载体,传统的基于琼脂糖的层析方法在工艺放大、产量提升以及杂质(如HCP等)去除等方面存在局限性。为了解决这些瓶颈问题,Astrea Bioseparations研发推出的新一代基于纳米纤维的层析介质LentiHERO为病毒纯化提供了新的思路。相比于传统的琼脂糖基质,LentiHERO不论从结合载量、杂质去除还是工艺放大等方面都具有显著优势。以下研究将从病毒的结合能力、回收率、HCP和dsDNA的去除能力、工艺放大等方面充分评估LentiHERO对不同包膜(VSV-G、4070A、GalV)的LVV假病毒和溶瘤病毒HSV的纯化性能。1. LVV生产和纯化工艺流程 LentiHERO对VSV-G LVV有更高的结合力与动态结合载量 下图是VSV-G LVV样品在不同流速下通过LentiHERO(LH)与Q膜流穿液的TU和p24检测结果,LentiHERO对LVV的结合能力显著高于Q膜。由此表明,LeniHERO在LVV流穿之前能够处理更大体积的料液。 LentiHERO有更高的动态结合载量 提升LVV回收率与纯度的优化方案 如下图所示,条件优化后LVV回收率提升至82%,收获的病毒滴度>2E+9 TU/mL,且HCD/HCP去除率>90%。 LentiHERO®可大幅减少纯化的缓冲液体积 生产规模所需的缓冲液体积预估 精氨酸洗脱可以省去洗脱后的稀释步骤,简化工艺流程; 低盐或精氨酸洗脱可显著减少缓冲液用量并降低处理体积。 使用LentiHERO® 1纯化非VSV-G包膜的LVV假病毒 重组慢病毒可以通过不同的包膜蛋白来提高转导效率和改变特异性,从而直接影响下游纯化策略。 不同类型慢病毒在细胞和基因治疗中的应用 LentiHERO® 1对LVV的回收率(TU) LentiHERO®成功实现了非VSV-G慢病毒(4047A:100%,GalV:36%)的高效纯化。 LentiHERO®具备强大的杂质去除能力,在不影响载体功能的情况下可去除>98%的HCP及>87%的dsDNA残留 2. HSV-1溶瘤病毒生产和纯化工艺流程 LentiHERO®纯化野生型HSV-1(KOS)的结果 筛选装置上样量15ml,测得填料载量为1.5E+10 IU/ml。 感染性HSV回收率为56%,LentiHERO®载量可达9.2E+9 IU/ml,大部分感染性HSV在0.6M NaCl条件下被洗脱。 LentiHERO®纯化pBACYAC-HSV-1(KOS)的结果 筛选装置上样量20ml,测得填料载量为3E+8 IU/ml。 用0.8M精氨酸洗脱,HSV回收率可达到69%,LentiHERO®载量可达1.4E+8 IU/ml,同时实现高效的杂质去除。 结论 LentiHERO®弱阴离子纳米纤维层析技术可广泛应用于多种病毒载体的纯化,包括不同包膜的慢病毒(4070A,VSV-G,GalV),溶瘤病毒HSV-1; LentiHERO®纯化病毒具有高回收率:4070A: 100%,VSV-G: 82%,GalV: 36%,HSV-1: 69% LentiHERO®具有高效的宿主蛋白去除效率:HCP去除率>97% LentiHERO®可放大形成平台工艺,适用于工业化生产 LentiHERO®具备拓展应用于其他病毒载体的潜力,如腺病毒,痘苗病毒及病毒样颗粒(VLPs)等 LentiHERO®支持基因治疗及溶瘤病毒生产工艺的优化 产品信息 货号 品名 规格 NL100100 Nereus LentiHERO 2 unit pack(离心管形式) LH0001001A LentiHERO® 1 1 mL(层析柱形式) LH0010001B LentiHERO® 10 10 mL(层析柱形式) LH0010001C LentiHERO® 100 100 mL(层析柱形式) 如您对上述产品感兴趣,欢迎点击这里填写信息,Astrea Bioseparations技术专家将为您提供个性化优化方案,切实帮您解决纯化工艺中的疑难问题。 Astrea Bioseparations于1987年孵化自剑桥大学,拥有超过30年层析介质研发和生产经验,是世界级层析介质产品与服务供应商。目前使用Astrea的产品已有超过21个生产工艺通过了FDA和EMA的批准。Astrea Bioseparations在全球拥有3个研发和生产基地,专注为生物大分子和CGT领域提供行业领先的层析介质和技术服务。Astrea Bioseparations推出的基于纳米纤维的新型层析技术,解决了传统生物分离工具载量低和工艺耗时问题,实现更快、更环保、更具成本效益的纯化过程,完全符合当今生物治疗创新的需求。 西美杰是Astrea Bioseparations中国区代理,为用户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎随时拨打西美杰客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>
京公网安备 11010802028692号 北京西美杰科技有限公司