不论是细胞治疗还是基因治疗都离不开病毒载体。目前使用较多的病毒载体类型包括:腺相关病毒(AAV)、慢病毒(Lv)、逆转录病毒(Rv)和腺病毒(Adv)等,这些常用病毒载体特性如下图所示:
特征
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慢病毒
Lentivirus |
逆转录病毒
Retrovirus |
腺相关病毒
AAV |
腺病毒
ADV |
基因表达
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稳转/瞬转
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稳转
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瞬转
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瞬转
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是否能感染可分裂的细胞
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是
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是
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是
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是
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是否能感染不分裂的细胞
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是
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是
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否
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否
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是否能整合到靶细胞基因组
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是
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是
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否
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否
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靶细胞的免疫反应
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低
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较低
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非常低
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高
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病毒滴度
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+++
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++
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+++
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++++
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转染效率
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+++
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++
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+++
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++++
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因此在选择病毒载体时,除了要考虑载体自身特征之外,如何包装并获取高滴度高活性的病毒载体对后续实验至关重要,针对病毒载体制备5大环节,小美为您推荐如下解决方案↓
1. 病毒载体包装质粒系统
西美杰代理的美国Cell Biolabs公司推出的病毒包装系统可满足多种重组病毒包装需求,包括四大类型病毒包装质粒AAV Helper Free System、ViraSafe™ Lentivirus Expression Complete Systems、Platinum Retroviral Expression Systems以及RAPAd® Adenoviral Expression Systems等。
2. 病毒包装试剂
A. 病毒包装专用转染试剂
西美杰代理的美国Mirus公司新推出的病毒包装专用转染试剂TransIT®-VirusGEN™与TransIT®-Lenti系列,专门针对AAV和Lentivirus设计,相比传统转染方法能获得更高的转染效率和病毒滴度,无动物源成分且兼容多种病毒包装系统及不同细胞系类型。
品名
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货号
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规格
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适用病毒类型
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TransIT®-VirusGEN™ Transfection Reagent
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MIR 6703
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0.3/0.75/1.5mL
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AAV & Lentivirus
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TransIT®-Lenti Transfection Reagent
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MIR 6603
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0.3/0.75/1.5mL
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Lentivirus
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B. Lv/Rv包装效率增强剂Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up
西美杰代理的101Bio品牌Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up用于重组慢病毒或逆转录病毒包装过程,可促进病毒基因组转录和RNA稳定,使转染效率提高10倍左右。
品名
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货号
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规格
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适用病毒类型
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Lentivirus 10X Titer-Up
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P906
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1 mL
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Lentivirus
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Retrovirus 10X Titer-Up
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P909
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1 mL
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Retrovirus
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C. AAV/Adv病毒释放液Virus-High® AAV/ADV Release Solution
西美杰代理的101Bio品牌Virus-High® AAV/ADV Release Solution是一款无需反复冻融,即可从细胞中快速高效收获AAV/Adv病毒以及其他非分泌型无囊膜病毒的试剂。
品名
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货号
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规格
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适用病毒类型
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Virus-High® AAV / Adv Release Solution
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P900
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10 mL
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AAV & Adv
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3. 高效快速病毒浓缩试剂与纯化试剂盒
西美杰代理的美国Cali-bio和Cell Biolabs品牌专门针对病毒载体设计的高效重组病毒浓缩纯化试剂(盒),在获得重组病毒高回收率的同时大大简化操作流程,无需超速离心设备,是中小规模样本纯化的首选方案。
重组病毒类型
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品名
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货号
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特点
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逆转录病毒
(Retrovirus) |
Retrovirus Concentration Solution(5×)
逆转录病毒浓缩试剂 |
CB300904
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无需超速离心;
1小时内病毒浓缩10-100倍; 浓缩后病毒适用于各种细胞; |
慢病毒
(Lentivirus) |
Lentivirus Concentration Solution(5×)
慢病毒浓缩试剂 |
CB300905
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ViraBind™ Lentivirus Purification Kit
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VPK-104
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操作时间< 2h,无需超速离心;
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回收率>90%,纯化效果与CsCl方法相当
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腺相关病毒
(AAV) |
ViraBind™ AAV Purification Kit
(适用样本量为2个10cm皿或1个15cm皿收获的上清) |
VPK-140
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适用于纯化AAV-2与AAV-DJ;
操作时间约3h; |
ViraBind™ AAV Purification Mega Kit
(一次处理样本量可达10个15cm皿收获的上清) |
VPK-141
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获得AAV纯度>95%,回收率>60%
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腺病毒
(ADV) |
ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit
(适用样本量为1个T75瓶或1个10cm皿收获的上清) |
VPK-099
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采用特殊滤膜和离心柱;
操作时间约30min,无需超速离心; |
ViraBind™ Adenovirus Purification Kit
(适用样本量约为4个T75瓶收获的上清) |
VPK-100
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回收率>90%,纯化效果与CsCl方法相当
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4. 病毒滴度检测试剂盒
精确测定重组病毒滴度是提高下游实验可控性,重复性和准确性的前提,西美杰代理的Cell Biolabs品牌针对不同病毒载体的特性分别设计的了多种滴度测定试剂盒,并且兼容了高效和精确的测定方法。
重组病毒类型
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品名
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货号
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特点
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慢病毒
(Lentivirus) |
Lentivirus Rapid Quantitation Kit
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VPK-112
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快速定量,操作过程45-60min;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度,纯化前或纯化后样品都可检测; 灵敏度:1010个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清 |
Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit
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VPK-107
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专利Pull-down技术分离出病毒相关P24蛋白,去除游离P24蛋白;
ELISA方法精确定量有活性的重组慢病毒滴度,避免传统方法检测总P24蛋白导致的误差 |
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Traditional p24 ELISA Kit
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VPK-108-H
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ELISA方法检测总P24蛋白定量慢病毒滴度
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逆转录病毒
(Retrovirus) |
QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit
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VPK-120
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快速定量,操作过程45-60min;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度,纯化前或纯化后样品都可检测; 灵敏度:1.5×109个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清 |
腺相关病毒
(AAV) |
QuickTiter™ AAV Quantitation Kit
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VPK-145
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快速定量,操作过程<2h;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度; 灵敏度:纯化前AAV可达109 GC/mL,对于纯化后AAV可达5×1010 GC/mL |
腺病毒
(ADV) |
QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit
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VPK-106
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快速定量,操作过程45-60min;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度,纯化前或纯化后样品都可检测; 灵敏度:1010个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清 |
QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit
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VPK-109
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无需空斑形成实验,避免复杂的铺琼脂步骤,操作更简便;
传统方法10天才可完成的实验,用该试剂盒仅需2.5天,有ELISA和ICC两种方法供选择; |
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QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit
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VPK-110
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可用于所有41个血清型的腺病毒
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5. 病毒感染增强试剂
西美杰代理的Cell Biolabs品牌还针对不同病毒载体研发了专用促病毒感染试剂,能显著提高病毒对靶细胞的感染,进而提高基因表达效率。
品名
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货号
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规格
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特点
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ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit
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LTV-200
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40 次
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复合型试剂能与慢病毒或逆转率病毒形成复合物,与Polybrene®相比病毒感染效率可提高2-6倍,适用于原代细胞和干细胞
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LTV-201
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200次
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ViraDuctin™ Retrovirus Transduction Kit
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RV-200
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40次
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RV-201
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200次
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ViraDuctin™ AAV Transduction Kit
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AAV-200
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10次
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有效提高重组AAV在多种细胞内的转染效率,包括传统方法转导效率低的细胞和非分裂细胞,如原代细胞和干细胞。该试剂使用方便,仅需2h,是AAV转染非分裂细胞的首选。
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AAV-201
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50次
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ViraDuctin™ Adenovirus Transduction Reagent
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AD-200
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10次
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该试剂让重组腺病毒感染不依赖于细胞的CAR(柯萨奇病毒-腺病毒受体)水平,可显著提高病毒感染低CAR或无CAR表达的细胞,如原代细胞或干细胞,还可提高转入基因的表达效率
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AD-201
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50次
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