宿主细胞蛋白（HCPs）对重组蛋白药物的稳定性、安全性和疗效具有负面影响。因此，确保最终药物的纯度和纯化工艺的一致性至关重要，需使用合格且具有广泛反应的HCP ELISA试剂盒。HCP ELISA检测试剂盒必须满足两个标准，即具有广泛的反应性，并且通过方法学验证。Cygnus HCP ELISA试剂盒是行业的金标准，以下内容详细介绍了Cygnus HCP ELISA试剂盒的正确实验操作与方法学验证流程，帮您高效掌握实验关键。

正确的洗板操作对于降低ELISA实验中的变异和消除背景干扰至关重要。如果您正在使用自动化洗板设备或实验结果的变异程度高于预期，希望以下文章能帮助您优化实验流程，确保实验结果回归正常。

如何用正确的洗板方法解决ELISA检测结果漂移的问题？

HCP ELISA检测方法必须要通过法规认可的实验方法（ICH或FDA指南等）进行方法学验证，以确保其能够产生准确的结果。想要获得准确的HCP ELISA检测结果，本质上是要保证样品中HCP的浓度高于试剂盒的定量下限（LOQ），同时HCP的检测抗体还要处于过剩状态，满足这两点就必须要对检测样品（过程样品和最终的药物原液）进行稀释线性验证。因此，稀释线性（dilution linearity）是验证HCP ELISA方法特异性和准确性的关键实验之一。

HCP ELISA方法验证——稀释线性dilution linearity

在ELISA试剂盒的使用过程中，确保结果的准确性至关重要。为了有效识别样品配方与试剂盒组分之间的兼容性，加标回收这一关键验证试验显得尤为重要。它不仅是评估ELISA试剂盒准确性的重要工具，也是满足法规和药典（如ICH或FDA指南等）对商品化ELISA试剂盒方法学验证要求的可靠方式。

HCP ELISA方法验证——加标回收（Spike & Recovery）

空白对照是指在实验设计中设置的一种阴性对照，旨在监测非特异性背景信号，并为基线吸光度值提供参考。在酶联免疫吸附测定（ELISA）中，通过引入空白对照，可以有效识别并扣除样品读数中的背景噪声，从而提高检测结果的准确性。然而，在多分析物ELISA测定中，由于其固有的高背景信号特性，这种标准化方法可能并不适用。下文将详细探讨为何在Cygnus的ELISA测定中通常不建议使用空白对照。

使用Cygnus ELISA试剂盒该如何设置空白对照？

ELISA是各国药典推荐的在生物制品中检测残留HCPs的方法，可以测定HCPs的总量。并且ELISA的操作简便，是经典的免疫学检测方法。但ELISA检测HCPs也有方法的局限性，比如不能从ELISA的结果中知道样品中有哪些HCPs，或者用于检测的抗体与哪些HCPs发生了免疫反应。因此，监管部门要求在使用ELISA检测过程中HCPs残留含量时，不仅要通过方法学验证证明试剂盒的准确度，精密度，灵敏度等，而且还需要证明使用的HCPs抗体有广泛的反应性，即HCPs抗体覆盖率。通过AAE-MS方法来识别最终药物中的高风险HCPs信息，进而确保这些HCPs能够被检测到。在完成以上所有方法学验证步骤后，该免疫检测方法就可用于过程样品监控和产品的批次放行。这个决策流程对于开发和验证通用型或工艺专属型HCP ELISA方法很有帮助，它展示了如何将正交AAE和MS方法相结合，通过数据来决定哪种类型的检测方法更适用于您的项目。

抗体亲和提取(AAE™)：革新宿主细胞蛋白(HCPs)分析的新篇章