为什么要验证HCP抗体覆盖率？

在对工艺中HCP（宿主细胞蛋白）的监控和产品放行中，ELISA一直被用作HCP检测的金标准。这主要是因为ELISA可以在mg/ml级别的产品蛋白中有效地检测ng/ml级别的HCP残留。并且ELISA的操作简便，是经典的免疫学检测方法。但ELISA检测HCP也有方法的局限性，比如不能从ELISA的结果中知道样品中有哪些HCP，或者用于ELISA检测的抗体与哪些HCP发生了免疫反应。因此，监管部门要求在使用ELISA检测过程中HCP残留含量时，不仅要通过方法学验证证明试剂盒的准确度，精密度，灵敏度等，而且还需要证明使用的HCP抗体有广泛的反应性，即HCP抗体覆盖率。

AAE是检测HCP抗体覆盖率的更有效方法

2014年，作为过程污染物残留检测产品领先开发商，Cygnus结合多年HCP抗体及试剂盒开发经验，推出了Affinity Antibody Extraction（AAE）方法验证覆盖率，突破了传统2DWB方法验证覆盖率的局限性，更真实准确反应HCP抗体覆盖率。AAE提取富集的样品和未经AAE提取的样品分别经过2D PAGE分离后使用银染的方法对得到的点进行匹配、计数、计算覆盖率。这种方法一经上市后，广泛得到生物制药企业和监控部门的认可。

AAE+MS更清晰地展示了工艺中HCP残留情况，进一步对产品质量安全做风险评估

现阶段，常用的HCP抗体覆盖率验证的方法都存在其自身的局限性。AAE方法解决了传统2DWB中的低灵敏度和低特异性的问题。而且，由于AAE可以在富集本身含量较低的HCP的同时，还可以大幅降低中间品和终产品中的药物蛋白。这使对中间品和终产品中HCP与HCP抗体的反应情况的分析成为可能。尽管如此，AAE和银染分析也不能具体得知样品中具体有哪些种类的HCP，尤其是那些与人体有较高免疫原性和对药物有较大影响的HCP。基于以上问题的考虑，Cygnus利用更精准的质谱检测方法与AAE相结合，推出了新一代的AAE和Mass Spectrum覆盖率验证服务。

AAE与Mass Spectrum可对上游和下游工艺中的样品进行分析，覆盖率的结果更高、更真实。更主要的是质谱可以对样品中是否存在潜在高风险的HCP做出鉴定并提供这些蛋白相关含量，分子量，等电点等信息。无论是药物研发人员，还是监管人员都可以对某个工艺中HCP残留情况有清楚的了解，从而做出更好的判断。

北京西美杰科技有限公司是美国Cygnus Technologies公司中国区总代理，负责销售Cygnus全线产品以及覆盖率验证，专属试剂盒定制等服务，并提供产品和服务售前和售后技术支持、服务样品寄送、进度跟踪、服务报告整理等一站式服务。如感兴趣请拨打西美杰热线电话：400-050-4006。