植物凝胶是植物组织培养过程中用来凝固培养基的物质,其自身一般不具有营养,作为固体支持物存在,一般在选用时考虑三个方面:1、使用方便;2、对培养植物不产生不利影响,不与培养基中其他组分例如抗生素发生反应;3、具有较好的透明度。
目前比较常用的植物凝胶主要包括:琼脂(Agar)、结冷胶(Gellan Gum)、卡拉胶(Carrageenan)等。琼脂是一种天然产物,主要来自红藻科的两个属:石花菜属(Gellidium)和江篱属(Gracillaria)。石花菜属本身小且生长缓慢,很难获得,不经济,但其来源的琼脂比江篱属来源的具有更高的凝胶强度。由于琼脂来自天然藻类,所以产品品质容易受到原材料由于生长环境变化导致的影响,最终产生批间差异。不过西美杰代理的Phytotech Labs做为具有20多年生产经验的植物组培产品供应商,在每批琼脂出厂时,会进行清晰度、凝胶强度、植物生物生长以及产品其他理化性质的评估,以确保产品的稳定性。卡拉胶同样来源于藻类,但比琼脂有更好的透明度。结冷胶是新型的凝胶,来源于微生物发酵产物,批间差更加稳定,而且具有用量小,透明度更高的有点。
西美杰代理的专业植物培养基品牌Phytotech Labs,可以为广大植物客户提供以下不同型号的植物凝胶:
A111 |
琼脂(江蓠来源) |
~1150g/cm2 |
6-10g/L |
通用型琼脂,价格更优惠 |
A296 |
琼脂(石花菜来源) |
~900 g/cm2 |
6-10g/L |
普通植物研究,微生物研究;石花菜生长缓慢很难获得,不经济,所以价格较A111高 |
A175 |
高纯度琼脂 |
~1100 g/cm2 |
6-10g/L |
用于胚胎发生等关键研究的高纯度琼脂;可替代A111,但比A111更纯净 |
A133 |
琼脂结冷胶混合物 |
TBD |
3.5-5 g/L |
用于工业化放大培养 |
C257 |
卡拉胶 |
TBD |
6-10g/L |
用于原生质体培养 |
C2000 |
卡拉胶(高透明度) |
>800 g/cm2 |
6-10g/L |
用于原生质体培养 |
G434 |
结冷胶 |
>800 g/cm2 |
2-4 g/L |
高透明度 |
G3251 |
结冷胶 |
400-700 g/cm2 |
2-4 g/L |
G434升级款 |
使用注意事项:
l G434与氨基酸糖苷类抗生素(特别是卡那霉素和潮霉素B)一起使用对植物生长有影响。如遇此类情况,建议降低抗生素的使用浓度。
l 结冷胶的溶解要求比较特殊,一是温度,结冷胶不溶于冷水,一定要是加入热水搅拌溶解;二是培养基中二价阳离子浓度是结冷胶凝固的关键,一般是Mg2+,和Ca2+这2种离子的总浓度在4-10mM适中,而且2种离子的浓度最好都不要低于1.5mM,低于或者过高都会影响凝胶效果,一般来说MS培养基中二价离子浓度是足够的,1/2MS培养基用结冷胶也可以凝固的很好,目前确定不适合用结冷胶的培养基有DKW,SH,LS。三是pH值,结冷胶凝固最适合pH值为5.8,一般高温灭菌影响不大,但不排除因为高压条件变化导致pH值变化影响的凝胶效果。
l 植物凝胶尤其是琼脂不凝固是与pH值有关系,pH过低导致的。出现此类情况是因为调节pH值的操作问题,很多客户都先调节了pH值,然后再加入了植物凝胶,这个过程中pH值可能会降低到5.2,才会不凝固。解决办法:加入琼脂粉后调节pH值。